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Anti-ACA11蛋白降解后如何補救
點擊次數：187 更新時間：2026-06-02
Anti-ACA11蛋白降解后，根據降解程度不同可采取對應補救方案，具體如下：
一、輕度降解（僅部分ACA11降解，內參條帶正常，ACA11仍可檢出但信號減弱）
可以通過以下方法補救，無需重新提取：
?增加上樣量?：將原有上樣量從20-40μg提升至50-60μg，彌補降解損失的靶標量，不超過80μg避免膠過載；
?提升檢測靈敏度?：將抗體濃度適當提高50%（從1:1000調整為1:500），更換超敏ECL發光液，延長曝光時間，提升弱信號檢出能力；
**后續操作規范：剩余樣本立即分裝，后續每次只用1管，避免繼續凍融降解。
二、中度降解（內參條帶變暗，ACA11信號非常弱幾乎看不見）
優先選擇「重新提取+優化制備流程」，這是的補救方式：
取用新鮮的擬南芥組織，全程冰上操作，裂解液中額外添加蛋白酶抑制劑（可以加倍用量，提升抑制效果）；
提取后立即用膜蛋白提取試劑盒富集ACA11，提升靶標濃度，減少雜蛋白干擾；
提取完成立刻按單次用量分裝成小份，-80℃凍存（比-20℃更穩定，能延緩降解），避免反復凍融。
三、重度降解（內參無條帶/彌散，ACA11無信號）
這種情況已經無法補救，必須丟棄原有樣本，重新提取新鮮組織制備樣本，提取時嚴格遵循以下規范避免再次降解：
全程冰上操作，組織取出后立即放入預冷的裂解液，減少蛋白酶作用時間；
必須添加足量蛋白酶抑制劑，提取后1小時內完成分裝凍存；
嚴格按單次用量分裝，絕對禁止反復凍融。